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So easy!IVF-ET操作细节必须拿捏死死哒~
发布时间:2022-05-20 11:09:28 | 浏览量:294

雌雄鼠长期合笼不能交配怎么办?

笼位紧张但需要大量扩繁怎么办?

短时间内产出大量同日龄的小鼠怎么办?

其实体外受精完全可以解决哦~

具体怎么操作?

胚胎移植实验细节是什么?

微信截图_20220520112152.jpg

小鼠体外受精-胚胎移植概念


小鼠体外受精-胚胎移植(In Vitro Fertilization-Embryo Transfer,IVF-ET):是指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精,将受精胚胎移入受体鼠体内产生幼崽过程的技术。

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小鼠体外受精-胚胎移植实验流程图



小鼠体外受精-胚胎移植实验细节


 实验前提 

小鼠体外受精-胚胎移植实验中使用的手术器械、手术设备、耗材和试剂等都需要严格进行消毒或灭菌操作。

受体雌鼠和结扎雄鼠都选用SPF级,手术前后都需要送检,严格监控小鼠质量。

细胞培养液和精子获能液等需要提前做滴并覆盖石蜡油放置于培养箱过夜平衡。


供体雌鼠的超数排卵

抓取小鼠动作轻快,减少鼠的应激。

注射器使用后,需要进行消毒,避免交叉感染。

头部偏下,45度左右进针,避免扎伤脏器。

进针深度小于1cm,进针的感受为局部皮肤凹陷消失和落空感,避免出现皮下注射。

拔针时等待1-2s,轻微旋转针头,再缓缓拔出。


图片2.jpg


小鼠腹腔注射示意图



供体雌鼠输卵管的采集

供体雌鼠安乐死后,快速消毒,采取俯卧位、两套工具剪开背侧皮肤和肌肉层。

快速准确采集输卵管,且确保不要剪破壶腹部。

输卵管可分多次少量采集,减少输卵管等待时间。

环境温度较低时,需添置加热设备。


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小鼠输卵管示意图



供体雌鼠卵母细胞的采集

输卵管如果血渍和毛发太多,放入石蜡油前需要先简单处理。

 划破输卵管壶腹部收集卵母细胞时,用力适度,划破但是尽量不留划痕,动作迅速。

卵母细胞复合物移入收集滴后,需检查是否收集完全,避免浪费细胞。

注意显微镜的温度,避免温度过高,影响细胞发育。

收集完细胞后,培养皿需及时放置于热台保温。


细胞培养液示意图


卵母细胞收集示意图



供体雄鼠附睾尾和精子的采集

附睾尾采集时尽量将脂肪剖离干净。

收集精子的培养皿需放置于培养箱中提前获能。

获能后观察精子的活力和浓度,根据状态好坏决定加液量多少。


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小鼠附睾尾示意图



卵母细胞和精子进行体外受精

每一批次的细胞培养液和精子获能液需提前观察其状态(如:颜色和沉淀),并做预实验验证其效果和摸索最佳条件。

细胞培养箱需要定时进行检查,观察温度、CO2浓度和微生物污染情况等。

微信截图_20220520112548.jpg


受体雌鼠进行胚胎移植

选择发情的受体雌鼠与提前试配不育的结扎雄鼠交配,挑取栓块明显且输卵管壶腹部明显的雌鼠进行二细胞移植。

手术过程中尽量减少受体鼠出血、活动和着凉等情况出现。

手术过程中注意细节,如:移植针的口径大小、手术加热装备、输卵管开口大小、细胞状态、移植气泡和液体比例和麻醉药剂量等。



是不是So easy?

其实把这些操作过程细节拿捏死死哒~

就是如此的So easy!


 
 
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